基于液相色谱-高分辨质谱技术表征仑卡奈单抗的结构*

来源：药物分析杂志2026年第5期北京时间：

作者：徐骏伟, 付建平, 徐志勇, 刘云飞, 柯春山, 苑洋洋

单位：1.江西省科学院医药与健康研究所,南昌 330096; 2.南昌大学临床医学实验中心,南昌 330031

摘要：目的: 利用液相色谱-高分辨轨道阱质谱技术对仑卡奈单抗进行结构表征。方法: 采用PLRP-S反相色谱（50 mm×2.1 mm,5 μm,1 000 Å）结合高分辨质谱技术对仑卡奈单抗进行结构表征。柱温60 ℃,以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL · mL-1。首先在一级质谱条件下,采用正离子模式分析完整蛋白及亚基,获得分子量信息;随后对还原样品进行分析,测定轻链和重链分子量。样品经胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解后,采用C18柱（50 mm×2.1 mm,2.6 μm）分离肽段,通过数据依赖采集模式鉴定肽段序列和二硫键,并利用二级质谱解析氧化、脱酰胺、糖基化等翻译后修饰位点。结果: 测定结果显示,仑卡奈单抗完整蛋白的相对分子质量为149 977,脱去N-糖后的相对分子质量为146 926。轻链和重链的氨基酸序列覆盖率均达到100%,所有16对二硫键均被鉴定,与理论连接方式一致。检测到的主要翻译后修饰包括氧化修饰、N-末端赖氨酸丢失、脱酰胺修饰以及N-糖基化修饰,其中N-糖基化修饰包含G0F、G1F和G2F糖型等多种主要糖型。结论: 本研究通过反相色谱-串联高分辨轨道阱质谱技术,成功实现了对仑卡奈单抗的完整分子量测定、亚基分析、肽序列覆盖及翻译后修饰鉴定,获得了其精细结构特征。该方法可为同类单克隆抗体的结构表征研究提供技术参考。

关键词：仑卡奈单抗,肽谱分析,翻译后修饰,二硫键分析,高分辨质谱,

基金资助：江西省科学院博士启动基金项目（2024YYB32）;国家自然科学基金地区项目（82260294）;国家自然科学基金地区项目（32260606）;江西省自然科学面上项目（20252BAC240730）;江西省科学院杰出青年培育计划（2023YSBG50005）