间充质干细胞单次膝关节腔注射给药在大鼠体内的组织分布*

来源：药物分析杂志2026年第5期北京时间：

作者：谭锦秀, 肖海蓉, 张臣, 李薇, 胡金芳, 闫凤英

单位：1.天津和创生物技术有限公司,天津 300301; 2.博雅干细胞科技有限公司,无锡 214000; 3.江苏集萃药康生物科技股份有限公司,南京 210032; 4.天津天诚新药评价有限公司,天津 300301

摘要：目的: 建立并验证大鼠体内人源间充质干细胞（MSCs）的分析方法,研究膝关节腔注射给药后,MSCs在免疫缺陷大鼠F344RG体内各组织的分布情况。方法: 以人源基因组第20号常染色体特异性序列为检测靶点,建立大鼠体内人源MSCs的实时荧光定量PCR（qPCR）分析方法（定量下限为每个反应0.015 36 ng）,并进行完整的方法学验证。qPCR体系为Premix Ex TaqTM（Probe qPCR）12.5 μL,上下游引物（1×10-5 mol · L-1）各0.5 μL,探针（1×10-5 mol · L-1）0.5 μL,模板5 μL,无酶无菌水补充至25 μL。程序为95 ℃预变性30 s（1个循环）;95 ℃变性5 s,54 ℃退火及延伸30 s（45个循环）,于退火及延伸阶段采集荧光信号。F344RG大鼠膝关节腔单次注射给予MSCs注射液,分别于给药后1、3、5、7、14、28、42 d采集动物全血、心、肝、脾、肺、肾、脑、骨髓、性腺（睾丸/卵巢）、注射部位关节组织,提取基因组DNA,以qPCR方法检测给药后血液及组织中受试药物的暴露量。结果: 成功建立了F344RG大鼠全血及各组织中人源MSCs的qPCR检测法,该方法不受干细胞供体性别的影响。给药后42 d内所有动物膝关节局部组织均能检测到间充质干细胞的存在,平均含量由297.83 ‱逐渐下降至1.21 ‱;给药后5、7 d分别在1只大鼠（每组共6只）肺部检测到间充质干细胞的存在,含量分别为1.99 ‱、0.94 ‱;其他受试组织器官均未检测到间充质干细胞的存在。结论: 建立的大鼠体内人源间充质干细胞分析方法可行。F344RG大鼠膝关节腔注射给药后,间充质干细胞主要分布于关节腔组织,且随时间延长含量逐渐降低;个别动物（2/42只）体内间充质干细胞可进入肺部,确切的机制有待进一步探讨。

关键词：间充质干细胞,实时荧光定量PCR,方法学验证,大鼠,组织分布,药代动力学,

基金资助：天津市科技计划项目：细胞和基因治疗（CGT）产品概念验证平台建设（24ZYCGCG00600）