基于多重实时荧光定量PCR的双歧杆菌四联活菌片快速检测方法研究

来源：药物分析杂志2026年第6期北京时间：

作者：郭颖慧, 徐晓洁, 孟晓丽, 任丽宏, 邢晟, 丁勃

单位：山东省食品药品检验研究院 产业技术基础公共服务平台 山东省食品药品安全检测工程技术研究中心,济南 250101

摘要：目的: 基于药品生产用菌种的溯源及检定等需求,为加强药品生产用菌种的质量控制,明确产品中菌株的分子特征与遗传背景,通过建立一种快速实时的菌株分子生物学检验方法,提升产品的质量保证水平与检验效率。方法: 针对双歧杆菌四联活菌片中四种微生物的保守基因,为每种微生物设计并优化包含一对内引物、一对外引物及一个探针的引物探针体系,结合不同探针的荧光报告基团,实现多通道检测。结果: 本研究可同时鉴定双歧杆菌四联活菌片中蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）和婴儿型双歧杆菌（Bifidobacterium infantis）四种微生物,最低DNA检测浓度可以达到10-4 ng · μL-1,扩增效率稳定（R2>0.99）,具有良好的耐用性和重复性。结论: 该方法基于多重实时荧光定量 PCR 技术,使用外引物和内引物双重检测机制,实现了在同一反应体系中同步完成四联活菌中多组菌种成分的鉴定,操作简便,灵敏度高,结果准确,缩短了实验周期。

关键词：内外引物双重扩增机制,多重实时荧光定量PCR,双歧杆菌四联活菌片,菌株鉴定,快速检测,