基于UPLC-Q TOF MS/MS的疫苗佐剂CpG寡聚脱氧核苷酸序列研究*

来源：药物分析杂志2026年第7期北京时间：

作者：李丹茜, 王瑾, 刘博, 王一平, 宁保明, 杨会英, 吴先富, 孙会敏

单位：中国食品药品检定研究院 药品监管科学全国重点实验室,北京 102629

摘要：目的: 建立基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q TOF MS/MS）的分析方法,用于CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG ODN）类免疫佐剂的序列测定,并为其质量控制与质量一致性评价提供技术支撑。方法: 以CpG ODN佐剂HP 007为研究对象,采用UPLC联用高分辨质谱进行分析。以三乙胺-六氟异丙醇离子对体系作为流动相,经C18色谱柱梯度洗脱分离后,在电喷雾负离子模式下采集一级质谱数据,以获得精确分子量信息;基于不同电荷态母离子的筛选,采用单一特定母离子独立靶向采集策略,获取二级特征碎片。对所得数据进行去卷积、碎片离子识别和序列匹配,并构建融合序列覆盖率、碎片匹配连续性及确证状态的多维指标综合判定框架,以确证目标序列。结果: HP 007的实测分子质量为9 345.51,该数值与目标物的理论分子质量（9 345.5）高度一致;不同电荷态母离子产生的碎片信息具有良好的互补性,结合多参数综合判定策略,可实现对目标序列的可靠确认。结论: 本研究建立的UPLC-Q TOF MS/MS序列确证方法,通过多电荷态母离子联合分析和多参数综合评价策略,提高了ODN序列确证的可靠性,弥补了单一覆盖率指标在序列判定中的局限性,可为CpG ODN类疫苗佐剂的序列确证及质量控制提供参考。

关键词：寡聚脱氧核苷酸,疫苗佐剂,序列确证,质量控制,去卷积,

基金资助：中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金（2024C1）;药品监管科学全国重点实验室课题《新型佐剂CpG质量控制、作用机制及标准物质研究》（2024SKLDRS0214）