施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第1期北京时间：

作者：张永强，吴晓东，赵永刚，王志亮

单位：中国动物卫生与流行病学中心，青岛 266032

摘要：拟建立施马伦贝格病毒（SBV）S基因焦磷酸测序检测方法，用于施马伦贝格病毒病的快速检测和确诊。通过对公开发表的SBV S基因序列与布尼病毒科其他11种病毒S基因进行比对，找出不同病毒变异区域集中且变异区域两侧保守的序列片段，基因合成，体外转录，作为基因扩增模板。在特异性变异序列两端的保守区域设计扩增引物，进行RT-PCR扩增。在保守区域设计双向测序引物，对RT-PCR产物进行双向焦磷酸测序。通过比对测序结果，确定是否为SBV核酸序列；优化条件，确定检测方法的敏感性、特异性和重复性，建立SBV S基因焦磷酸测序检测方法。结果：建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法扩增基因片段长度为166 bp；敏感性为可检测到104个拷贝；每一条测序引物可准确测出50 bp左右核酸序列，双向测序可准确测出100 bp左右核酸序列，具有较好特异性，完全满足施马伦贝格病毒病确诊要求；重复测序3次，均能准确测出100 bp左右核酸序列。本研究建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法，可用于施马伦贝格病毒病的检测和确诊，整个检测过程可在1 d内完成，大大缩短了确诊时间。

关键词：

基金资助：现代农业产业技术体系（奶牛）（NYCYTX-0305）