牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第1期北京时间：

作者：彭统全，邵建伟，张润祥，曹翀，马波，高明春，王君伟

单位：(东北农业大学 动物医学学院，哈尔滨 150030)

摘要：克隆牛α0干扰素（BoIFN-α0）成熟肽基因，使其在真核细胞中表达，并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因，然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体 pPICZαA 上，构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-α0，重组质粒经PmeⅠ酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100 μg•mL-1 zeocinTM筛选和PCR鉴定，阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明：SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18 和21 ku，推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明，重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性，达到5.72×106 U•mg-1。这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础。

关键词：

基金资助：现代农业(奶牛)产业技术体系(CARS-37)；国家科技支撑计划项目(2012BAD12B05)；国家科技支撑计划子课题(2012BAD12B03-3)；黑龙江省科技攻关项目(GA09B302)