猪杀菌/通透性增加蛋白基因siRNA载体构建及干扰效果评价

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第3期北京时间：

作者：吴正常，殷学梅，夏日炜，孙寿永，朱国强，吴圣龙，包文斌

单位：(1.扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009； 2.扬州大学兽医学院，扬州 225009)

摘要：本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)BPI基因的高效siRNA干扰载体，为在细胞水平上研究猪BPI基因的功能和作用机制提供基础。参照猪BPI基因（GenBank登录号：EF436278）全长编码区序列，设计其特异性发夹siRNA干扰片段，并将其克隆插入pcDNA 6.2-GW/EmGFPmiR干扰载体中，构建猪BPI基因4个干扰siRNA表达载体RB1、RB2、RB3和RB4，1个阴性对照NC，并通过PCR和测序进行验证，构建成功后转染猪小肠上皮细胞IPEC-J2并检测其干扰效率。结果发现，所构建的4个特异性siRNA载体均可显著降低猪BPI基因mRNA表达（P<0.05），其中RB4载体干扰效果最好，其干扰效率达到69%。本研究成功筛选可靶向干扰猪BPI基因的高效siRNA，为今后在细胞水平进一步研究BPI基因对猪肠道革兰阴性菌感染抗性的作用及其机制奠定了试验基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31172183；31140027）；转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX08006-001B）；江苏省科技支撑计划(BE2012330；BE2013345；BE2014357)；江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)