猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第4期北京时间：

作者：訾臣，夏日炜，殷学梅，喻礼怀，朱国强，吴圣龙，包文斌

单位：1.扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 225009；2.扬州大学兽医学院，扬州 225009

摘要：髓性分化因子88 (MyD88) 作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白，在免疫应答和疾病防御中起重要作用，作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞，为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪MyD88基因的shRNA表达载体和1个MyD88基因高表达载体，通过实时荧光定量PCR方法鉴定瞬时共转染293细胞中MyD88基因转录水平，筛选获得干扰猪MyD88基因效率最高的shRNA表达载体，将其包装成慢病毒载体，用于建立MyD88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞。最终成功获得MyD88基因沉默效率达到69.3%的小肠上皮细胞，达到基因功能分析的要求。MyD88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得，为猪肠道病原微生物所引起的TLRs/IL-1R信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31172183；31140027）；转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX0800601B）；江苏省科技支撑计划(BE2012330；BE2013345；BE2014357)；江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)