猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第4期北京时间：

作者：肖启玲，李朋辉，闫秉芳，杨路，王喜亮，肖运才，李自力，刘梅，毕丁仁，石德时

单位：1．华中农业大学动物医学院，农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070；2.华中农业大学动物医学院，农业部兽用诊断制剂创制重点实验室，武汉 430070；3．罗德岛大学生物医学科学系，药物基因组学与分子治疗中心，金士顿02881，美国

摘要：为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1（PLE1）并研究其功能，利用RT-PCR与常规PCR方法，从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体，在OrigamiTM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达，纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686 bp的片段，该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting 结果显示，PLE1融合蛋白质成功表达，在30 ℃的培养温度下，IPTG诱导6 h后，PLE1重组蛋白质表达量最高，且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明，PLE1融合蛋白质水解底物p-NPA的酶活力为1.24 U。研究结果不仅为研究PLE1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质，也为PLE同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31372484）；湖北省自然科学基金（2012FFB02906）；中央高校基本科研业务费专项资金（2011PY117）