绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第5期北京时间：

作者：刘月，张宇飞，孙晓林，刘淑英

单位：1内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；2农业部动物临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特 010018

摘要：为制备抗绵羊肺腺瘤病毒（JSRV）囊膜蛋白（ENV）胞质尾区（CT）的单克隆抗体，利用生物信息学分析JSRV囊膜蛋白氨基酸序列，根据分析结果合成多肽，将此多肽分别连接钥孔血蓝蛋白（CT-KLH）和牛血清白蛋白（CT-BSA），用CT-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合。建立间接ELISA方法筛选分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，获得1株能稳定分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为8E5，亚类为 IgG2a/κ。间接ELISA检测培养上清效价为6.4×103，腹水效价为1×105。Western blot及免疫组化结果显示，这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别JSRV抗原，与其发生特异性反应。试验结果证明，单抗8E5是绵羊肺腺瘤的重要诊断试剂。应用8E5细胞株分泌的单克隆抗体建立JSRV-ENV的双抗体夹心ELISA检测方法，该ELISA检测方法特异性、重复性和敏感性良好，为快速检测诊断绵羊肺腺瘤和研究囊膜蛋白功能奠定了基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31160493；31360597）；内蒙古科技创新引导基金项目（20130224）；教育部博士点基金博导类项目（20111515110008）