转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌的构建及其肉鸡饲喂效果验证

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第5期北京时间：

作者：王磊，曹平华，蔡蓓，高印，高康，杨雨鑫，杨明明，袁超，陈玉林

单位：1.西北农林科技大学动物科技学院，杨凌 712100； 2.青海大学青海省畜牧兽医科学院，西宁 810016；3.河南科技大学动物科技学院，洛阳471003； 4.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州 730050

摘要：本研究旨在构建可胞外分泌内切葡聚糖酶，且具有降解β-葡聚糖能力的转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌，并对其进行肉鸡饲喂效果验证，为后续转基因乳酸杆菌在动物生产中的应用奠定基础。采用PCR和酶切连接方法构建pLEM4157（cel） 载体，转化Lactobacillus.reuteri XC1感受态细胞，进行聚丙烯胺凝胶电泳表达谱分析和内切葡聚糖酶活性测定，同时测定其肉鸡饲喂效果。结果表明，克隆的内切葡聚糖酶基因大小为1 500 bp，经测序比对，与已报道基因序列相似性为99%，氨基酸序列相似性为100%；Native-PAGE 和SDS-PAGE分析结果表明，内切葡聚糖酶基因celW成熟肽在罗伊乳酸杆菌的蛋白分子量均为52 ku左右，与理论计算值相符； L.reuteri pLEM4157（cel） 培养上清和胞内上清内切葡聚糖酶活性分别为（0.96±0.08）和（0.37±0.09） U•mL-1； L.reuteri pLEM4157（cel） 对肉仔鸡生长性能无显著影响，但可显著降低21日龄肉仔鸡十二指肠、空肠pH，促进21日龄肉仔鸡肾、法氏囊、胸腺和胰腺的生长发育，增加42 日龄肉仔鸡的胸腺和胰腺指数，提高肉仔鸡21日龄血清白球比、钙、磷含量和42 日龄血清葡萄糖含量。L.reuteri pLEM4157（cel） 成功分泌表达了内切葡聚糖酶，具有降解羧甲基纤维素的能力和一定的肉鸡饲喂效果。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金资助项目（cyh200803）；国家公益性行业（农业）专项（20090300606）