关岭牛MyoD I基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第5期北京时间：

作者：桓聪聪，许厚强，陈伟，陈祥，赵佳福，张雯，周迪，夏丹

单位：1.贵州大学生命科学学院，贵阳 550025；2.贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室/贵州大学动物科学学院/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室，贵阳 550025

摘要：本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性，初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板，设计5'端加磷的引物，PCR扩增获得4个不同长度的关岭牛MyoD I启动子，定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区，构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I。利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠C2C12细胞，依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD I启动子的启动活性。结果显示，MyoD I基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高；目的片段成功替换pEGFP-N3载体的CMV区；重组质粒能在小鼠C2C12细胞中成功表达，细胞在激发光下发绿色荧光。本研究成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I，4个启动子均具有启动活性，其中P3启动子在小鼠C2C12细胞中表达量最高，初步推断P3启动子为该基因的核心启动子。

关键词：

基金资助：转基因生物新品种培育重大专项 (2013ZX08009-004)；黔科合重大专项(字［2013］6008号)；贵州省科技厅农业攻关项目(黔科合NY字［2012］3008号)；贵州大学研究生创新基金(研农2014021)