双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库的构建与鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：胡湘云，高小龙，付向晶，刘丹丹，范文涛，王燕平，杜恩岐，王兴龙，党如意，杨增岐

单位：(西北农林科技大学动物医学院，杨凌 712100)

摘要：构建双峰驼天然重链抗体可变区（VHH）酵母双杂交文库，并对文库质量进行鉴定。采集未经免疫的6月龄雌性双峰驼外周血、骨髓、脾和淋巴结，并从外周血中分离淋巴细胞。抽提总RNA，反转录为cDNA，用2对引物经过2轮PCR扩增得到400 bp左右的双峰驼VHH片段。根据Clontech公司Mate & PlateTM library construction system使用手册，将带有同源臂的VHH片段与线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母感受态细胞，转化产物涂布SD/-Leu平板，30 ℃倒置培养3～5 d后，收集平板上的所有克隆，即为双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库。对文库的滴度、重组效率及多样性进行鉴定。结果显示，本研究构建的双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库库容为2.07×107，滴度为7.6×108 cfu•mL-1。随机挑取47个独立克隆进行菌落PCR鉴定，43个含有VHH片段，重组率为91.5%；选取其中19个测序，均为独立克隆，且多样性好。该研究成功构建双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库，且文库质量满足要求，为进一步获得特定抗原的VHH奠定了基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金(31272578)；西北农林科技大学引进人才科研启动基金(Z111021006)