单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：谢堃，乔军，孟庆玲，彭叶龙，赵海龙，马玉，陈诚，才学鹏，陈创夫

单位：1.石河子大学动物科技学院，动物疾病防控兵团重点实验室，石河子 832003；2.中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046

摘要：拟构建单核细胞增生李斯特菌（LM）非编码RNAril87基因缺失株，对其进行分子鉴定，分析rli87基因缺失对LM生长的影响。用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体，并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体，将其转化入LM-SB5感受态细胞，利用温度（42 ℃）和氯霉素（10 μg•mL-1）的抗性双重压力来实现同源重组，筛选同源重组菌进行分子鉴定，测定缺失株与母源野毒株37 ℃条件下生长曲线。结果显示：PCR和测序结果证实成功获得了LM-Δrli87重组菌。通过25代的连续传代，PCR鉴定结果显示，该缺失株具有良好的遗传稳定性。与野毒株进行对比，在37 ℃条件下缺失株与野毒株的生长差异不显著（P>0.05）。非编码RNA rli87基因在37 ℃条件下对LM生长没有明显的调控作用。

关键词：

基金资助：国家国际科技合作专项（2014DFR31310）；国家自然科学基金（30960274；31360596）