犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：虞一聪，冯娜，闫飞虎，盖微微，王铁成，王化磊，郑学星，赵永坤，黄耕，杨松涛，高玉伟，夏咸柱

单位：1.吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118；2.军事医学科学院军事兽医研究所，吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，长春 130122；3.中国农业科学院长春兽医研究所，长春 130122；4.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009

摘要：为表达具有天然构象的犬瘟热病毒（CDV）囊膜糖蛋白融合蛋白（F）和血凝素蛋白（H），本研究扩增小熊猫源CDV驯化致弱株LP的F、H基因，克隆至pFastBacTM1载体中，测序验证后转化至DH10BacTM感受态细胞，同源重组获得穿梭质粒rBacmid-F、rBacmid-H，将其分别转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB-F、rpFB-H，并将表达的重组融合蛋白（rF）和血凝素蛋白（rH）进行IFA和Western blot鉴定。以犬抗CDV高免血清对重组杆状病毒感染细胞进行IFA鉴定，在感染细胞的细胞膜上可见特异性荧光反应；以鼠抗F、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体对重组杆状病毒感染细胞进行Western blot检测，可见相对分子质量为63和68 ku左右的条带，分别为重组融合蛋白（rF）和血凝素蛋白（rH），大小与预期相符。两种囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中均成功表达，且具有良好的反应原性。本研究为CDV病毒样颗粒疫苗的开发等工作奠定了基础。

关键词：

基金资助：国家公益性行业（农业）科研专项（201303042）