鸡朊样蛋白Doppel基因的克隆及其与PrPC相互关系分析
来源：畜牧兽医学报杂志2015年第8期北京时间：
作者：张天亮，吴润，杨润霞，魏姣，万学瑞，刘霞，刘磊，张小丽
单位：1.甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2.甘肃农业大学生命科学技术学院，兰州 730070
摘要：克隆鸡Doppel蛋白（ChDpl）基因（PRND）并初步分析其与正常细胞型朊蛋白（PrPC）的相互关系，为禽源Dpl结构与功能、Dpl与PrPC互作关系机制的研究提供理论依据与分子基础；以多物种Dpl氨基酸序列为基础，通过比对找到Dpl氨基酸序列保守区，设计简并引物并依据鸡的密码子偏好性对引物进行优化，以逐步降低其简并性。用此特异性引物以聚合酶链式反应（PCR）扩增鸡PRND基因，并将其克隆到pMD-18-T载体，鉴定后将序列上传GenBank数据库。结合Dpl与PrPC相关研究初步分析两者的相互关系；多物种Dpl氨基酸序列比对发现，第11—150位（139个氨基酸残基）为Dpl氨基酸序列保守区，以此区域设计引物并进行PCR扩增，得到约417 bp的目的条带，GenBank登录号为KP140962。综合分析PrPC与Dpl相关研究发现，尽管Dpl与PrPC具有相似的翻译后修饰和空间结构，但两者多表现为拮抗作用，即PrPC能够拮抗Dpl的神经毒作用，尤其是其N-端包含八肽重复区的第23—88位残基对于保护Purkinje细胞免受Dpl诱导的神经退化作用至关重要。禽源Dpl的成功克隆不仅填补了目前研究的空白，更在分子水平为后续研究Dpl结构与功能及其与PrPC的拮抗机制奠定了基础。
关键词：
基金资助：国家自然科学基金资助项目（31160510）；甘肃省自然科学研究基金计划项目（1107RJZA198）
