非编码小RNA （RyhB）调控禽致病性大肠杆菌毒力相关基因的分析

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第8期北京时间：

作者：尹磊，祁克宗， 涂健，周秀红，刘红梅，王曼，张艳娜

单位：安徽农业大学动物科技学院，合肥 230036

摘要：以小RNA（RyhB）为研究对象，探索RyhB对禽致病性大肠杆菌相关毒力基因的调控研究。采用Red同源重组技术构建APEC野生株（AE17）RyhB的缺失株△RyhB以及构建出回复株△RyhB-comp。运用活菌计数法分别观察AE17、△RyhB、△RyhB-comp黏附鸡胚成纤维细胞DF-1的能力，并且利用Real-time PCR检测AE17、△RyhB和△RyhB-comp的 8个毒力基因转录水平。结果成功构建出了基因缺失株△RyhB和回复株△RyhB-comp，△RyhB黏附细胞能力较AE17均有显著地降低，约为AE17的62.5%，△RyhB-comp较△RyhB黏附能力显著上升，为△RyhB的1.4倍。同时，Real-time PCR结果显示，△RyhB的bcfA、fyuA、tsh、luxS、fimC、ompA毒力基因的转录水平均极显著下降（P＜0.01），其mRNA转录水平分别约为AE17的19%、52%、20%、14%、28%、52%；△RyhB的iss、ibeA毒力基因表达水平分别上调约1.14倍和1.2倍。表明RyhB的缺失能够减弱APEC黏附DF-1的能力，并且使毒力基因的转录水平有所降低。根据以上结果，推测RyhB对APEC的毒力具有极其重要的调节作用。

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基金资助：国家自然科学基金项目（31372402）