悬滴培养法促进鸡胚胎干细胞形成类胚体

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第8期北京时间：

作者：张蕾，王宵燕，左其生，路镇宇，王飞，纪艳芹，王颖洁，张亚妮，李碧春

单位：1.扬州大学动物科学与技术学院 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 225009；2.江苏农牧科技职业学院，泰州 225300

摘要：本研究旨在通过悬浮培养法培养鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells，ESCs)，摸索鸡胚胎干细胞形成类胚体（Embryoid body，EB）的最佳方案，以期提高鸡胚胎干细胞体外诱导效率。 将鸡ESCs培养传代至第3代，采用1×104、3×104和6×104 mL-13个细胞浓度，使用悬滴培养后，观察类胚体的形成效率。对悬滴培养形成的类胚体进行形态学观察，qRT-PCR检测干细胞标记基因的表达，免疫细胞化学检测相关蛋白的表达，并进行类胚体自分化检测和核型分析。3×104 mL-1细胞浓度生成的类胚体数量最高，单个视野下可观察到约267个类胚体，且形成的类胚体大小均一，呈圆球状。qRT-PCR检测结果表明，在类胚体形成48 h内，干细胞标记基因Nanog、Sox2、Oct4和C-kit仍维持表达。免疫细胞化学检测显示，该方法形成的类胚体表面抗原检测Nanog和SSEA-1呈阳性。自分化检测三胚层分化标记基因SOX17、SMA和TUJ-1呈阳性。核型分析显示，悬滴培养形成的类胚体具有并保持正常的核型。鸡ESCs悬滴培养形成类胚体的适宜细胞浓度为3×104 mL-1，且形成的类胚体可分化成3个胚层，用于体外定向诱导过程。本研究建立了鸡ESCs体外悬滴培养形成类胚体的培养体系，为后期信号通路的体外验证提供试验基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金(31272429；31472087)；江苏省研究生科研创新基金(CXZZ13_0909)