牛偏爱密码子优化后的Beta蛋白多克隆抗体制备

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第10期北京时间：

作者：齐昱，邢燕平，周欢敏，房君，钱呈，王海涛

单位：内蒙古农业大学生命科学学院，呼和浩特 010019

摘要：本研究旨在优化λ噬菌体bet基因，使其能够在牛细胞中高效表达，通过密码子优化及全基因合成方法制备牛bet基因，并进行原核表达和多克隆抗体制备及抗体效价评估。从GenBank中获得λ噬菌体bet基因的序列，登录号为AP005153，用牛偏爱密码子对其进行优化并将其合成。根据优化后的基因序列设计引物，用PCR扩增优化后的bet基因，随后将其克隆到pET28原核表达载体，并转化入大肠杆菌BL21中进行诱导表达。表达的蛋白产物利用亲和层析的方法进行纯化，用His tag 的抗体进行Western blot 鉴定。用纯化后的蛋白免疫CD1小鼠，得到抗Beta蛋白的血清，通过ELISA测定该多克隆抗体的滴度。结果表明：通过双酶切和测序，成功挑选出正确的原核表达质粒pET-bet；SDS-PAGE，电泳结果显示融合蛋白表达成功；用纯化后的蛋白免疫试验鼠后得到多克隆抗体，经Western blot 检测，该多克隆抗体能与His-Beta融合蛋白特异性结合；经ELISA方法检测该多克隆抗体的滴度为1∶41 700。成功地制备了Beta蛋白的多克隆抗体，为深入探索bet基因的生物学功能和在牛及大型哺乳动物中的应用奠定了基础。

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