狂犬病病毒单质粒拯救系统的建立及应用

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第11期北京时间：

作者：孙玉章，何彪，许运斌，丛彦龙，Karl-Klaus Conzelmann

单位：(1.中国动物卫生与流行病学中心，青岛 266032；2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130122；3.浙江大学动物科学学院，杭州 310020；4.吉林大学动物医学学院，长春 130062；5.慕尼黑大学基因中心，慕尼黑 81377

摘要：旨在建立一种针对狂犬病病毒SAD L16株单质粒拯救的反向遗传操作系统。根据全长cDNA感染性克隆pSAD-L16 N、P和L基因上游序列的不同，分别设计多对引物将EMCV IRES序列、PV IRES序列和TaV 2A序列分别克隆入pSAD-L16载体的相应位置中，构建成5个重组狂犬病病毒全长cDNA克隆。在无需辅助质粒的情况下直接转染BSR T7/5细胞拯救病毒，并对拯救病毒进行生物学特性的鉴定和分析。结果表明，只有pSAD-NeNePeL和pSAD-NeNtPeL能够成功拯救出重组狂犬病病毒，获救病毒均高度致弱且增殖缓慢。获救的2株重组狂犬病病毒具有不同的遗传稳定性，表现出与野生型亲本毒株较大的差异。本研究首次建立起一种针对狂犬病病毒的单质粒拯救系统，为深入研究狂犬病病毒基因组结构与功能、分子致病机制以及狂犬病病毒与宿主相互作用等提供了一个基础的技术平台。

关键词：

基金资助：青岛市优秀人才引进计划（Q201402025）；国家留学基金委资助项目（CSC-LMU2011）；德国自然科学基金（DFG SFB870）