一种同时进行牛囊胚差异染色和凋亡染色的方法

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第11期北京时间：

作者：孙尉峻，于学颖，胡庭溪，郭芹芹，刘岩，郝海生，赵学明，朱化彬，杜卫华

单位：1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193；2.河北工程大学，邯郸 056000；3.甘肃农业大学，兰州 730070

摘要：旨在优化双重荧光染色方法的基础上，建立囊胚的三重免疫荧光染色方法，以期更经济、高效、准确地评估胚胎质量。三重免疫荧光染色方法分别用CDX2蛋白、caspase-3蛋白和Hochest 33342标记囊胚的滋养层细胞、凋亡细胞和所有细胞的细胞核，共3种染色方案。双重荧光染色方法采用PI染色滋养层细胞，或通过TUNEL法进行凋亡细胞染色；而囊胚细胞的细胞核用Hochest33342染色。结果表明，三重免疫荧光染色方法获得的图像清晰，能准确地标记囊胚中的各类细胞。另外，比较3种染色方案的准确性、复杂性及染色效果，确定两种一抗或两种二抗共同孵育的方案准确度高、效果好、且用时最短，为最佳染色方案。综上表明，在同一枚囊胚中，通过标记CDX2和caspase-3蛋白来鉴定其滋养层细胞和凋亡细胞，并进行囊胚质量的评估是可行的，而且较双重荧光染色有较大的优势。

关键词：

基金资助：基本科研业务费重点项目（2013ywf-zd-2）；国家科技支撑项目（2012BAD12B01-2）；家畜胚胎工程与繁殖创新团队（ASTIP-IAS06-2015）