enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第11期北京时间：

作者：张宇飞，石晶，刘淑英

单位：1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；2.农业部动物临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特 010018

摘要：旨在深入研究内源性绵羊肺腺瘤病毒（enJSRV）囊膜蛋白在绵羊胎盘形成过程中的作用，本研究体外培养了蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞，采用RT-PCR技术扩增出enJSRV-env基因及其受体Hyal2基因全长序列，定向克隆于真核表达载体pEGFP-C1上。优化绒毛膜滋养层细胞电转染条件和测定电转效率。将构建好的真核表达质粒分别电转染到绒毛膜滋养层细胞中，在荧光显微镜下观察enJSRV囊膜蛋白及其受体Hyal2的瞬时表达情况。并研究高表达enJSRV-env基因及通过RNA干扰沉默enJSRV-env基因对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合活性的影响。结果显示，真核表达质粒构建成功，分别命名为pEGFP-C1/enJSRV-env及pEGFP-C1/Hyal2。研究表明，绵羊绒毛膜滋养层细胞最佳电转染条件为脉冲电压150 V，脉冲时间5.0 ms，电击2次，间隔50 ms。转染pEGFP-C1/enJSRV-env质粒及pEGFP-C1/enJSRV-env与pEGFP-C1/Hyal2共转染的绵羊绒毛膜滋养层细胞中多核细胞数目明显增加，平均每个视野分别可以观察到1.8和2.3个多核细胞。说明enJSRV-env对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合有一定的促进作用。本研究为进一步探究enJSRV囊膜蛋白的结构和功能及绒毛膜滋养层细胞融合机理提供试验基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31160493；31360597）；内蒙古科技创新引导基金项目（20130224）；教育部博士点基金博导类项目（20111515110008）