SG97A平衡致死系统的构建及其初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第12期北京时间：

作者：耿士忠，陈晓娟，潘志明，焦新安

单位：扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009

摘要：敲除鸡伤寒沙门菌(SG)减毒疫苗株97A asd基因，构建宿主载体平衡致死系统并表达新城疫病毒(NDV)F蛋白，构建二价活菌苗。PCR扩增两段位于asd基因外侧的序列作为等位基因，以氯霉素抗性(CmR)基因替代asd基因，构建自杀质粒pGMB151Δasd：：CmR，通过E.coli χ7213与SG97A固相杂交，将质粒转入SG97A，反向筛选获得SG97AΔasd：：CmR，利用质粒pCP20去除CmR后，DAP的依赖菌株命名为SG97AΔasd。将含asd基因的质粒pYA3334转入SG97AΔasd中构建宿主载体平衡致死系统，并表达NDV-F蛋白。结果表明，通过等位基因重组方法，成功构建SG97AΔasd及宿主载体平衡致死系统，重组菌能够表达NDV-F蛋白，并能在鸡体内诱导产生特异性抗体。本研究成功构建SG97AΔasd宿主载体平衡致死系统，并表达NDV-F蛋白及其诱导宿主产生抗体，为应用该系统构建二价活菌苗的研究奠定了基础。

关键词：

基金资助：公益性行业(农业)项目(201403054)；“863”项目(2011AA10A212)；中国博士后基金（2014M551670）；江苏省重点实验室开放课题(0273896034819)；江苏省博士后基金(1302067C)；扬州大学创新培育基金(2013CXJ070)