表达水泡性口炎病毒双血清型G蛋白重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2015年第12期北京时间：

作者：薛晓娟，金红岩，赵玲娜，隋修锟，Zheney Makay，李刚

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 动物营养学国家重点实验室/农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站，北京100193

摘要：旨在以人5型复制缺陷型腺病毒为表达载体，构建表达水泡性口炎病毒(VSV)双血清型G蛋白的重组腺病毒。利用融合PCR技术扩增VSV-IN-G-NJ-G基因并将其克隆至腺病毒穿梭载体pacAd-CMV K-NpA中。通过Pac Ⅰ酶线性化后，与同样经PacⅠ酶线性化的骨架载体pacAd5 9.2-100共转染AAV-293细胞，获得重组腺病毒rAd-VSV-IN-G-NJ-G。该重组腺病毒于AAV-293细胞连续传代至20代效价稳定。经间接免疫荧光和Western blot检测，G蛋白获得正确表达。将重组腺病毒接种小鼠，利用间接ELISA及病毒中和试验检测其体液免疫水平，结果显示可诱导产生VSV特异性抗体，其中和抗体水平在1∶32；利用淋巴细胞增殖试验检测细胞免疫水平，结果表明可以引起接种小鼠强烈的淋巴细胞增殖。构建的重组腺病毒免疫小鼠后可以引起一定的体液免疫和细胞免疫反应，为表达VSV糖蛋白重组腺病毒疫苗的深入研究奠定了基础。

关键词：

基金资助：国家科技支撑计划项目（2013BAD12B05）；国家自然科学基金项目（31172342；31472203）；转基因重大专项（2014ZX0801203B）；国际合作项目（D32025/17453）；国家公益行业项目（200903037-2）；创新团队基金（ASTIP-IAS15）