1型鸭甲肝病毒VP3蛋白的抗血清中和活性分析及B细胞表位鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第1期北京时间：

作者：沈友林，汪铭书，程安春，贾仁勇，朱德康,陈舜,刘马峰，刘菲，杨乔,孙昆峰，陈孝跃

单位：1.四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心，成都 611130；2.四川农业大学预防兽医研究所，成都 611130；3.动物疫病与人类健康四川省重点实验室，成都 611130

摘要：旨在探究1型鸭甲肝病毒（DHAV-1）VP3蛋白抗血清的中和活性并鉴定VP3的线性B细胞表位。利用pGEX-4T-1表达载体，在BL21(DE3)宿主菌中原核表达DHAV-1 VP3基因，以切胶纯化出的蛋白质为抗原免疫兔制备多克隆抗体，通过鸡胚中和试验对多抗的中和效价进行检测；采用Karplus&Schulz、Emini、Jameson-Wolf和Parker方法分别对柔韧性、表面可及性、抗原性及亲水性进行分析，得到了4条候选线性B细胞表位，以制备的兔抗VP3多克隆抗体为一抗，通过间接ELISA方法对人工合成的B细胞表位进行鉴定，并进一步用临床鸭血清样品对鉴定的B细胞表位的抗体检测能力进行评估。结果显示，VP3在BL21(DE3)中以包涵体形式表达，大小约54 ku，Western blot分析表明重组蛋白质具有较好的反应原性。制备的兔抗VP3多克隆抗体的琼扩效价达到1∶16，并能中和DHAV-1，中和效价为1∶39；利用间接ELISA鉴定出GKRKPCRRPIHKPKNPPQEP（1—20 aa）、FNTGRYQMSWYPIADGEQSL（131—150 aa）和VNSSAPSNID（200—209 aa）为VP3的B细胞表位，抗体检测能力试验结果显示表位肽可检测临床DHAV-1鸭血清。本研究表明DHAV-1 VP3的抗血清具备一定的中和活性，1—20 aa、131—150 aa和200 —209 aa为VP3的B细胞表位且具有临床应用前景。

关键词：

基金资助：国家“十二五”科技支撑计划（2015BAD12B05）；国家现代农业（水禽）产业技术体系专项（CARS-43-8）；四川省创新团队项目（12TD005/2013TD0015）