GP5Δ84-119稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响
来源：畜牧兽医学报杂志2016年第2期北京时间：
作者：王晓红，宋林林，李亮亮，袁传奇，姜博，周恩民，穆杨
单位：1.西北农林科技大学动物医学院，杨凌 712100；2.农业部兽用药物与兽医生物技术陕西省科学观测实验站，杨凌 712100
摘要：为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制，利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒（pPB-GP5Δ84-119），转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆，筛选稳定表达GP5Δ84-119的Marc-145细胞系，并利用cck-8试剂盒检测细胞的增殖情况；用PRRSV SD16株感染筛选的细胞，通过病毒基因拷贝数和病毒滴度检测GP5Δ84-119表达对PRRSV复制影响；通过Real-time PCR和ELISA检测病毒感染前后细胞IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达情况。经RT-PCR、Western blot和IFA检测，GP5Δ84-119在Marc-145细胞中获得稳定表达，将此细胞命名为Marc-145-GP5Δ84-119；细胞增殖曲线显示GP5Δ84-119的表达不影响细胞的增殖；对病毒基因拷贝数和病毒滴度检测发现GP5Δ84-119的表达可以抑制PRRSV的复制，这种抑制作用可能是通过上调IFN特别是IFN-β的表达而实现的。研究表明GP5第二胞外区在PRRSV复制中发挥重要作用。
关键词：
基金资助：国家自然科学基金青年项目（31201883）；中央高校基本科研业务费（2014YB010；2452015318）
