单增李斯特菌膜裂解相关基因缺失突变株的构建及生物学特性鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：江玲丽，高有领，周向阳，白帆，方春，钱国英，方维焕

单位：1.宁波卫生职业技术学院，宁波 315100；2.浙江万里学院，宁波 315100；3.舟山出入境检验检疫局，舟山 316000；4.浙江大学动物预防医学研究所，杭州 310058

摘要：拟探明单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）分离株M7可能的低致病力机制。利用SOE-PCR及同源重组法构建M7膜裂解相关基因hly及plcB单缺失（M7-Δhly和M7-ΔplcB）及双缺失突变株（M7-Δhly/plcB），比较它们与亲本株的生物学特性差异。结果如下：PCR及反转录PCR表明突变株构建成功。突变株M7-Δhly和M7-Δhly/plcB因hly缺失致其溶血活性丧失。plcB缺失突变株M7-ΔplcB和M7-Δhly/plcB无可见溶脂活性。单缺失突变株M7-ΔplcB、M7-Δhly与M7具有相似的细胞黏附及增殖能力（P＞0.05）。MOI为1 000时，双缺失突变株M7-Δhly/plcB对Caco-2细胞毒性最低（11.10%），M7-Δhly次之（23.53%）（P<0.05）。空斑试验表明菌株M7和M7-ΔplcB仅能在无庆大霉素培养基中形成空斑。hly及plcB缺失致单增李斯特菌对免疫抑制小鼠毒力降低。单增李斯特菌M7低致病力可能与hly及plcB的高水平表达有关，致细菌对宿主细胞毒性增强而从细胞内逸出，使其不能躲避宿主免疫系统而被清除。

关键词：

基金资助：浙江省科技厅公益技术研究农业项目(2014C32047)；2015年度留学人员科技活动项目择优资助经费项目；浙江万里学院省重中之重学科开放基金（KF2014007）；宁波市自然科学基金（2015A610189）；浙江检验检疫局重点科研项目（2014-ZKZ-017）