白绒山羊PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对肌内脂肪细胞增殖分化的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：杜琛，李金泉,陈秀娟

单位：(1.内蒙古医科大学附属医院，妇产科生殖医学中心，呼和浩特 010050；2.内蒙古农业大学动物科学学院，动物遗传育种与繁殖自治区重点实验室，呼和浩特 010018)

摘要：本研究以绒山羊肌内脂肪细胞为试验材料，通过靶向阻断过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ基因，建立稳定干扰的肌内脂肪细胞株，探讨绒山羊PPARγ基因在肌内脂肪细胞增殖和分化过程中的功能。采用慢病毒质粒包装系统构建特异靶向白绒山羊PPARγ基因的RNA干扰（RNA interference，RNAi ）慢病毒载体，用以建立PPARγ基因稳定沉默的肌内脂肪细胞株。利用实时定量和Western blot 方法检测PPARγ基因在干扰组和对照组不同时间点的表达情况，并通过MTT和油红O染色法研究绒山羊PPARγ基因对肌内脂肪细胞增殖和分化的影响。经测序证实合成的含PPARγ-shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确，对肌内脂肪细胞的感染效率为80%以上，荧光定量和Western blot检测慢病毒介导的shRNA可以有效降低PPARγ的表达，其mRNA和蛋白水平作用的时间相隔24 h。沉默PPARγ基因后，脂肪细胞内甘油三脂的浓度明显低于对照组，相反MTT检测干扰组中细胞增殖能力高于对照组。本研究构建了绒山羊shRNA-PPARγ慢病毒干扰载体，成功转染至肌内脂肪细胞后可明显抑制脂肪细胞的分化，而促进肌内脂肪细胞的增殖，为进一步研究PPARγ基因在绒山羊脂肪细胞代谢通路中的作用及脂肪沉积机制奠定基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（30960246）；内蒙古自然科学基金（2010Zd11）；国家科技支撑项目（2011BAD28B05）；国家绒毛用羊现代农业产业技术体系(CARS-40-05)