伏马菌素B1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用
来源：畜牧兽医学报杂志2016年第5期北京时间：
作者：姚静静，胡骁飞，韩俊岭，李青梅，王方雨，邓瑞广，张改平
单位：1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室 农业部动物免疫学重点实验室，郑州 450002；2.新乡医学院第一附属医院，新乡 453100；3.河南农业大学，郑州 450002
摘要：拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B1（FB1）单克隆抗体，并初步应用于FB1的检测，以期为FB1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法（EDC）制备人工抗原FB1-BSA和FB1-OVA。以免疫原FB1-BSA免疫BALB/c小鼠，每四周免疫一次。四免后，小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后，采用ELISA筛选，建立分泌抗FB1抗体的单克隆杂交瘤细胞株；采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB1单抗，并鉴定单抗的各种性能；初步建立FB1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3，该细胞株分泌的 mAbs的效价高达1∶1.02×106，亲和力常数平均值为7.98× 1010 L•mol-1，亚型为IgG3。FB1 mAbs的工作浓度为1∶6.0×104，与FB1发生特异性反应，间接竞争ELISA测得IC50=43.65 ng•mL-1；与FB1结构类似物FB2和FB3的交叉反应率分别为385% 和72.4%，与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%，平均值为98.81%；变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB1单抗，并初步建立FB1免疫学检测方法。
关键词：
基金资助：国家科技支撑计划课题（2014BAD13B05）；河南省农业科学院优秀青年基金项目（2013YQ29）；河南省基础与前沿项目（162300410135）
