rfaE基因通过MAPKs/NF-κB信号通路对副猪嗜血杆菌LOS诱导猪肺泡巨噬细胞炎症反应中作用的研究

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第5期北京时间：

作者：曾泽，何欢，任玉鹏，岳华，张斌

单位：西南民族大学 生命科学与技术学院，成都 610041

摘要：作者拟研究rfaE基因在副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）脂寡糖（LOS）刺激猪肺泡巨噬细胞（PAMs）信号通路分子的转录表达和MAPKs/ NF-κB信号通路中的作用。提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株（ΔrfaE）和互补株（cΔrfaE）的LOS，分别用5和10 μg HPS-LOS、ΔrfaE-LOS和cΔrfaE-LOS刺激PAMs，分别在不同时间点收集细胞，提取RNA和蛋白质。将提取的RNA反转录成cDNA，运用RT-PCR检测TLR4、MD2、NF-κB、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平。测定提取蛋白质的浓度，利用Western blot方法检测NF-κB p65/phospho-NF-κB p65、IκBα、ERK1/2、JNK和p38/phospho-p38蛋白的表达量。结果表明用5和10 μg HPS-LOS刺激细胞6、12和24 h后，TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平均显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的以上转录因子的mRNA水平（P<0.05），但 NF-κB的mRNA转录水平无显著差异。另外，用5和10 μg HPS-LOS刺激细胞6和12 h后，IκBα蛋白的表达量显著低于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的IκBα蛋白的表达量（P<0.05），NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量（P<0.05）。同时cΔrfaE-LOS刺激PAMs后TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平以及NF-κB p65和p38的磷酸化水平和IκBα、ERK1/2和JNK蛋白水平能够恢复到HPS-LOS水平。以上试验结果证实在HPS-LOS诱导的炎症反应中，缺失rfaE基因后通过阻断MAPKs/ NF-κB信号通路以减轻炎症反应。

关键词：

基金资助：四川省科技计划项目青年基金（2014JQ0044）；国家自然科学基金（31302119）；四川省教育厅创新团队项目（13TD0057）；公益性行业(农业)科研专项（201303034-1）；西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（2016NGJPY10）