坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第5期北京时间：

作者：提金凤，李志杰，李秀丽，张敏敏，张媛媛，刁有祥

单位：1.山东农业大学 动物科技学院，泰安 271018；2.山东畜牧兽医职业学院，潍坊 261061

摘要：为了建立坦布苏病毒（TMUV）感染鸭群的抗体检测方法，以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原，建立了间接ELISA方法，并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+)，利用BL21（DE3）表达NS1蛋白，纯化后其质量浓度为4.16 μg•μL－1。通过方阵试验，确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100 ng•孔-1，检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化，优化后的结果：抗原的最佳包被条件是4 ℃作用过夜；酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍，37 ℃作用1 h；阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测，其检测结果显示，该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上，且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测，描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律，为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法，尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31272583；31472199）；国家水禽产业技术体系项目（CARS-43-10）；山东省科技发展计划项目（2014GNC111023）