牦牛星状病毒的RT-PCR检测方法的建立和变异分析

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：陈曦，汤承，张斌，宋志刚，周芳，岳华

单位：西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041

摘要：近期作者实验室从腹泻牦牛粪便样本中鉴定出一种新型星状病毒（AstV）——牦牛AstV，本研究旨在建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。首先设计引物扩增牦牛AstV 630 bp的ORF2基因片段，进行序列分析；在此基础上设计检测引物，建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。结果显示，从20份牦牛腹泻粪便中扩增出13个牦牛AstV ORF2基因片段，核苷酸相似性为99.3%～100%，而与牛肠源星状病毒（BAstV）ORF2基因的相似性仅为59.5％~80.8％；所建立的RT-PCR方法只扩增牦牛AstV的特异片段，对BAstV和其他无关病原无扩增；对病毒核酸的最低检测限为57.3 fg•μL－1；比较试验表明，所建立的RT-PCR方法对牦牛AstV的检出率明显优于现有检测BAstV的RT-PCR方法。其对牦牛腹泻与健康粪便样本中牦牛AstV的检出率分别为55.5%（76/137）和7.7%（2/26）（P <0.01）。试验结果表明，扩增的ORF2基因片段的核苷酸序列在牦牛AstV毒株间高度保守，但相对于BAstV变异大；基于该序列建立的检测牦牛AstV的RT-PCR方法特异性好，灵敏度高，稳定性好，为牦牛AstV的检测和流行病学调查提供了有力工具；同时，本试验结果也提示牦牛AstV与犊牦牛腹泻有联系。

关键词：

基金资助：“十二五”高技术研究发展计划（863计划）课题（2012AA101304）；四川省科技计划项目青年基金（2014JQ0044）；四川省教育厅创新团队（13TD0057）；西南民族大学研究生创新型科研项目（CX2015SZ067）