施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的表达及单克隆抗体制备

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：张永宁，宋姗姗，吴绍强，林祥梅

单位：中国检验检疫科学研究院 动物检疫研究所，北京 100029

摘要：为表达与纯化具有天然构象的施马伦贝格病毒（Schmallenberg virus，SBV）核衣壳（N）蛋白，并制备其单抗（McAb），本研究在SBV-N基因的N端加入6个组氨酸（6×His）标签后，将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBacTM 1中，构建重组供体质粒pFastBac-His-SBV-N。将pFastBac-His-SBV-N转化DH10Bac E.coli，通过蓝白斑筛选获得重组杆粒rBacmid-His-SBV-N。将rBacmid-His-SBV-N转染Sf9昆虫细胞制备表达His-SBV-N融合蛋白的重组杆状病毒，借助Ni-NTA琼脂糖纯化重组杆状病毒感染Sf9细胞中的His-SBV-N蛋白。以纯化的His-SBV-N免疫BALB/c小鼠制备McAb，利用ELISA叠加试验检测McAb抗原识别位点的异同，并采用高碘酸钠法对识别不同抗原表位的McAb进行辣根过氧化物酶（HRP）标记。最终获得了4株识别不同抗原表位的McAb（2A11、2E1、4H11和6E12）并进行了HRP标记；亚型鉴定表明，2A11为IgG1亚型，2E1、4H11和6E12均为IgG2b亚型；间接免疫荧光试验证实，4株McAb均能够识别稳定表达SBV-N蛋白的BHK-21细胞系；Western blot进一步表明，HRP标记的4株McAb均与His-SBV-N蛋白发生特异性反应。His-SBV-N融合蛋白及其McAb的成功制备，为施马伦贝格病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。

关键词：

基金资助：“十二五”国家科技支撑计划课题（2013BAD12B01）；中国检验检疫科学研究院“青年英才计划”项目（CAIQ-YC-20140205）；国家质检总局科技计划项目（2013IK054）