兔胎儿成纤维细胞的分离培养和鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：魏如雪，赵学明，郝海生，杜卫华，朱化彬

单位：(中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193)

摘要：本研究旨在建立稳定传代的兔胎儿成纤维细胞系及其鉴定方法。取配种后14~15 d的兔胎儿，0.25%胰酶消化胎儿皮肤获得兔胎儿成纤维细胞，体外传代培养；通过观察细胞形态、测定生长曲线、免疫荧光染色、核型分析等鉴定兔胎儿成纤维细胞，PCR扩增SRY基因鉴定2株细胞系性别。研究结果表明，兔胎儿成纤维细胞呈梭形，可在体外快速生长，符合“潜伏期-对数期-平台期”的生长规律；免疫荧光染色结果显示，波形蛋白与纤维连接蛋白染色为阳性，细胞角蛋白染色为阴性，表明兔胎儿成纤维细胞纯度高，活性好；染色体检测结果显示，在传至第5代时，80%的成纤维细胞核型正常，为2n=44，属正常范畴；PCR法检测的2株细胞系均来源于兔雄性胎儿。综上表明，本研究建立了兔胎儿成纤维细胞系体外培养、传代、鉴定及其性别鉴定方法，可为转基因兔、克隆兔、兔诱导性多能性干细胞等研究提供充足、可靠的成纤维细胞来源。

关键词：

基金资助：家畜胚胎工程与繁殖创新团队（ASTIP-IAS06-2016）；国家自然科学基金面上项目（31472100）