CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：左其生，王颖洁，赵瑞丰，程少泽，汪怡临，靳锴，王飞，纪艳芹，路镇宇，张文慧，张亚妮，李碧春

单位：扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009

摘要：本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系，实现目的基因定点敲除，为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP (chr2，Expression In PGC) 基因全长，并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3，并构建cas9/gRNA载体；将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1，利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明，只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性，荧光活性比对照组高两倍，T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%，TA克隆测序结果表明，30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加，初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术，该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31301959；31272429；31472087）；高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20123250120009）；中国博士后基金（2012M511326；2014T70550）；江苏高校优势学科建设工程资助项目；大学生创新创业训练计划项目（201411117033Z）