BMPR-IB基因的克隆及其在绒山羊成纤维细胞中的表达

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：孙洪新，王红娜，张英杰，刘月琴，陈晓勇，敦伟涛

单位：1.河北农业大学动物科技学院，保定 071001； 2.河北省畜牧兽医研究所，保定 071000

摘要：本研究旨在克隆BB基因型小尾寒羊的BMPR-IB基因编码区，构建重组载体，瞬时转染绒山羊成纤维细胞，并对BMPR-IB等基因的表达情况进行检测。采用 RT-PCR方法扩增BMPR-IB基因完整编码区，构建真核表达载体pEGFP-BMPR-IB，经脂质体Lipofectamine LTX&PLUS介导转染绒山羊成纤维细胞，并分别于转染后48和72 h收集细胞，分别提取RNA和蛋白，利用RT-PCR和Western blot方法检测相关基因的表达情况。结果扩增得到了包含BMPR-IB基因完整编码区全长在内的1 550 bp片段，与已知序列高度同源；Real-time PCR检测结果均表明，转基因组细胞中BMPR-IB表达量显著高于空白对照组（P<0.01），IGF-Ⅰ基因表达量也显著上调（P<0.01），TLR4、IFN、MHC、PNRP、GDF5、INH基因的表达量显著降低（P<0.01）；Western blot检测表明，转染组BMPR-IB、IGF-I的表达有所增加，BMP4、TLR4的表达略有降低，但差异均不显著（P>0.05）。本研究成功实现了小尾寒羊BMPR-IB基因在山羊成纤维细胞中的表达，为转BMPR-IB基因阳性细胞株和细胞系的建立提供了基础；研究表明BMPR-IB（BB型）基因的过表达能上调IGF-Ⅰ基因的表达，下调TLR4基因的表达。

关键词：

基金资助：国家肉羊产业技术体系资助项目(CARS-39)