基于倒毛鸡LSm14A分子序列分析的原核表达与免疫原性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第7期北京时间：

作者：伍昌华，陈绍品，温贵兰，李晨，李天珍，林汉卿，管国丹，王开功，文明，龚新勇

单位：(贵州大学动物科学学院 预防兽医学实验室，贵阳 550025)

摘要：旨在探明倒毛鸡LSm14A分子序列特征与免疫原性。通过提取倒毛鸡肝总RNA，经RT-PCR分别扩增倒毛鸡LSm14A全长CDS区与原核表达片段；采用分子生物学技术构建携带倒毛鸡LSm14分子的原核表达质粒；经IPTG诱导表达、His-tag镍柱纯化表达的重组蛋白质；纯化重组蛋白质rHis-cLSm14A分别免疫小鼠与兔制备相应的多克隆抗体；采用间接ELISA与Western blotting方法分析表达蛋白质的免疫原性。结果显示：倒毛鸡LSm14A全长CDS为1 386 bp，与原鸡源LSm14A相似性达100%，与鸭源的LSm14A相似性为95.1%；与鼠、爪蟾、猴、人、猪、鹅源的LSm14A相似性相对较低；鼠源、兔源抗cLSm14A多克隆抗体ELISA效价均高于1∶3 200；Western blotting结果显示，重组表达蛋白质分别被His抗体、鼠源与兔源抗cLSm14A多克隆抗体所识别，蛋白质条带大小约为19.6 ku。以上结果说明倒毛鸡源LSm14A分子具有较高的保守性与良好的免疫原性，研究结果为研究倒毛鸡的生物学特性与宿主的抗病毒天然免疫机制奠定了基础。

关键词：

基金资助：贵州大学博士基金项目［贵大人基合字(2013)12］；国家自然科学基金(31460668)；贵州大学研究生创新基金项目(研农2015024)；贵州大学“本科教学工程”项目（JKSP2013004）；贵州省科技创新人才团队项目［黔科合人才团队（2015）4016］