基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第7期北京时间：

作者：宋金委，李辉，陈哲，施振旦，王振勇

单位：1.山东农业大学动物科技学院，泰安 271018； 2.江苏省农业科学院畜牧研究所，南京 210014

摘要：旨在建立鹅催乳素（Goose prolactin，gPRL）的高灵敏度的测定方法。本研究设计出基于PRLR-JAK-STAT5信号通路的荧光素酶报告基因系统。首先克隆鹅PRLR基因CDS区序列，合成信号转导和转录激活因子5 (Signal transducer and activator of transcription 5，STAT5) 信号应答序列，并分别插入真核表达载体pCMV6-Entry和荧光素酶报告载体pGL3-Enhancer中，构建成为信号接收载体和信号应答载体。然后将两载体同筛选基因载体pEZX-MR03及内参载体pRL-TK共转染到HEK293T细胞中，经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染的转基因细胞株。分别用终浓度为0、30、60、90 ng•mL-1的PRL刺激转基因细胞，通过qRT-PCR和双荧光素酶检测系统测定在不同PRL浓度下转基因细胞株中荧光素酶（Luciferase， Luc）基因的相对表达量和相对活性的变化。筛选出10株成功整合有全部4个转基因载体的转基因细胞株，经过不同浓度PRL刺激后，筛选出一株细胞，其荧光素酶基因表达量和酶活性均表现出随PRL浓度升高而上调的趋势。结果表明，建立的基于PRLR-JAK-STAT5信号传导系统检测鹅PRL生物活性的新方法是可行的，为准确测定家禽PRL奠定基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金项目（31372314）；江苏省自然科学基金（BK20130718）