CRISPR/Cas9介导RB1基因敲除及其在鸡前脂肪细胞分化、增殖中的功能研究

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第9期北京时间：

作者：张琦，黄娇娇，杨彩侠，王宇祥，张慧，赵建国，李辉

单位：1.东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030； 2.农业部鸡遗传育种重点实验室，哈尔滨150030；3.中国科学院动物研究所 干细胞与生殖生物学国家重点实验室，北京 100101

摘要：旨在研究RB1基因在鸡前脂肪细胞分化和增殖过程中的功能，本研究利用CRISPR/Cas9系统在鸡前脂肪细胞中敲除RB1基因，检测鸡前脂肪细胞的分化和增殖能力及相关标志基因的表达水平。结果表明，CRISPR/Cas9系统能够有效介导RB1基因的敲除并引起RB1基因翻译的提前终止，敲除效率可以达到10%。油红O提取比色和CCK-8的结果显示，敲除RB1基因后，鸡前脂肪细胞的分化能力减弱、增殖能力增强；qRT-PCR结果显示，RB1基因敲除之后脂肪细胞分化标志基因G0S2、FAS、A-FABP的mRNA表达水平下降，尤其是G0S2基因的表达水平在前脂肪细胞分化的各个阶段都表现为显著的下降。同时RB1基因敲除还引起细胞周期相关基因CyclinD1、E2F1、Ki67、PCNA的mRNA表达水平升高。初步推断，RB1基因可能是调控鸡前脂肪细胞分化和增殖的关键调节因子。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（青年科学基金）（31301960）；国家863项目(2013AA102501)；现代农业产业技术体系建设专项（CARS-42）