ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第10期北京时间：

作者：王萍，郝文艳，曹丽华，沈开元，代小丽，李海艳，梁贤威，石德顺，李湘萍

单位：1.广西大学，亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530005；2.中国农业科学院广西水牛研究所，南宁 530001

摘要：为研究猪miR-148a（ssc-miR-148a）的转录调控机制，对其启动子进行了克隆及分析。本试验首先设计特异性PCR扩增引物，分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段，并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。通过生物信息学方法，在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位。将重组报告质粒转染293T细胞，分析启动子活性。采用不同浓度碱性成纤维生长因子（bFGF）处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞，检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1（DNMT1）的表达，及其对启动子活性的影响。结果显示，克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043 bp片段具有启动子活性，该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点。 0、5和10 ng•mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后，ssc-miR-148a表达均显著下降（P<0.05），DNMT1 mRNA显著增加（P<0.05）。启动子活性均显著下降（P<0.05），5和10 ng•mL-1浓度间无显著差异（P>0.05）。结果表明，ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043 bp片段内，启动子区域有转录因子SP1结合位点，其表达受bFGF的调控。

关键词：

基金资助：广西壮族自治区研究生教育创新计划项目（YCBZ2014013）；国家自然科学基金（31560632）；广西自然科学基金项目（2014GXNSFAA118084）；广西水牛遗传繁育重点实验室开放课题项目（SNKF-2014-03）