猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第11期北京时间：

作者：刘璨颖，徐卓菲，付强

单位：1.佛山科学技术学院生命科学与工程技术学院，佛山 528000；2.华中农业大学动物科学与动物医学院，武汉 430070

摘要：旨在以猪链球菌（Streptococcus suis, S. suis）3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）为药靶，给S. suis病防治研制新型抗菌药提供理论和试验基础。原核表达了S. suis HMGR，用Ni-NTA树脂对重组蛋白质进行了纯化，并用分光光度法测定了其酶活力。此外，运用CLUSTALW对同源HMGR氨基酸序列进行多序列比对。通过SWISS-MODEL对S. suis HMGR三维结构进行同源建模，并用PROCHECK评价模型的质量。酶活力测定结果显示，催化HMG-CoA还原为甲羟戊酸的反应中，S. suis HMGR最佳反应温度和pH分别为37 ℃和5.0，其Vmax和Km为846 U•mg-1和0.213 mmol•L－1。经分析显示，肺炎链球菌HMGR晶体结构（PDB ID：3QAE_A）是构建S. suis HMGR三维结构的最佳模板。构建的三维结构模型经质量评估证实为可靠的理论模型，将有助于虚拟筛选出对抗S. suis感染的新型抗生素，酶活力的测定为用试验手段验证S. suis HMGR抑制剂的有效性提供了可行性的方法。

关键词：

基金资助：广东普通高校青年创新人才项目（2015KQNCX173）；广东省自然科学基金-博士启动（2014A030310020）