水牛bbu-miR-103-1在泌乳期与非泌乳期表达模式及靶向基因的初步研究

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第11期北京时间：

作者：蔡小艳，李胜，陈秋萍，王萍，邓凯，刘庆友,石德顺

单位：(1.广西大学，亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004； 2.广西壮族自治区畜牧研究所，南宁 530001)

摘要：旨在探讨bbu-miR-103-1在水牛泌乳期和非泌乳期的差异表达模式，并预测其靶向调控基因及功能。本研究应用qRT-PCR检测bbu-miR-103-1，在水牛泌乳期和非泌乳期的差异表达。构建bbu-miR-103-1前体表达质粒LpEZX-pre-miR-103-1,并在293T细胞中包装高滴度的慢病毒颗粒，用于感染水牛乳腺上皮细胞实现过表达bbu-miR-103-1，同时应用化学合成的bbu-miR-103-1抑制剂转染水牛上皮细胞实现抑制表达bbu-miR-103-1，研究bbu-miR-103-1对PANK3及乳脂代谢相关基因表达的影响。结果表明，水牛泌乳期bbu-miR-103-1的相对表达量为非泌乳期的5.29倍（P＜0.01）；成功构建的慢病毒载体LpEZX-pre-miR-103-1包装获得了感染滴度为3.47×106 PFU•mL-1的慢病毒颗粒；过表达和抑制表达bbu-miR-103-1分别极显著下调和上调了水牛乳腺上皮细胞PANK3基因的相对表达量（P＜0.01）；过表达bbu-miR-103-1极显著提高了ACACA、GPAM、DGAT1和PDK4基因的表达（P＜0.01），对SREBP1c、ADFP、CD36、ACSS1等基因产生了显著的上调作用（P＜0.05）。过表达bbu-miR-103-1通过下调PANK3的表达，反馈提高了SREBP1c的mRNA水平，促进了以ACACA开头的脂肪酸从头合成。表明bbu-miR-103-1对水牛乳脂肪合成有十分重要的促进作用，为揭示水牛高乳脂形成和调控机理提供了分子依据。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金(31260552)；国家高技术研究发展计划(863计划)(2011AA100607)；优势生态牧草品种遴选及果草耦合系统碳氮源汇的研究与示范（桂科合14125008-2-13）；国审牧草新品种紫色象草的繁育与推广（桂渔牧科201453057）