牦牛肠道病毒间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2016年第12期北京时间：

作者：何欢，叶勇刚，陈新诺，王斌星，覃思楠，刘燕，汤承，张斌

单位：1.西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041；2. 国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队，成都 610041；3.四川省畜牧科学研究院，成都 610066

摘要：为了建立准确、快速的牦牛肠道病毒（yak enterovirus）检测方法，利用本实验室已获得的一株牦牛肠道病毒SWUN-AB001，免疫健康兔获得抗SWUN-AB001高免血清，建立了一种检测牦牛肠道病毒的间接免疫荧光试验（IFA）方法，并对其工作条件和时间进行筛选，优化出最佳条件。采用该方法对40份临床腹泻样本进行了牦牛肠道病毒的检测，并与RT-PCR的检测结果进行比较。结果表明：获得的高免血清在该IFA方法中的最佳稀释度为1∶100，工作时间为30 min；FITC标记的羊抗兔IgG（二抗）的稀释度为1∶800，工作时间为45 min，牦牛肠道病毒特异性亮绿色荧光颗粒清晰可见；同时与牛病毒性腹泻病毒、轮状病毒、大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌和空肠弯曲杆菌反应均未见明显的荧光颗粒；该方法能够检测SWUN-AB001病毒的最低浓度约为20 TCID50•mL-1；该方法的临床检测结果与RT-PCR的检测结果之间无差异（P=0.329）。结果表明该方法特异性强、重复性好、灵敏度高，为该病毒在牦牛养殖地区的流行病学调查、临床诊断和快速诊断试剂的开发奠定了基础。

关键词：

基金资助：“十三五”国家重点研发计划（2016YFD0500907）;四川省科技计划项目青年基金（2014JQ0044）；四川省教育厅创新团队项目（13TD00527）；四川奶牛传染系流产的病原调查研究（SASA2015A12）；西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（2016NGJPY10）