山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：王咪，李文良，郝飞，毛立，杨蕾蕾，张纹纹，江杰元

单位：1. 江苏省农业科学院兽医研究所 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，南京 210014；2. 南京农业大学动物医学院，南京 210095

摘要：山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病，与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡，笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N，克隆到质粒pET32a(+)上，构建重组质粒pET32a-N，并转化至大肠杆菌BL21中，IPTG诱导表达重组N蛋白并鉴定。通过条件优化建立ELISA抗体检测方法，并检测临床样品与HI试验进行比较。本试验成功构建重组质粒，诱导表达的蛋白质（47 ku）经SDS-PAGE与Western blot鉴定，证明其正确表达且具有良好的抗原性与特异性。利用纯化的蛋白质作为包被抗原优化间接ELISA反应条件，确定其最佳抗原包被浓度为1 μg•mL-1、血清稀释度为1∶200、血清作用时间60 min、酶标二抗工作浓度为1∶6 000、二抗反应时间30 min、底物显色时间10 min。通过对138份临床血清样品检测发现其与HI试验结果符合率达88.41%。本研究建立的间接ELISA检测方法敏感、特异、准确，适用于临床样品的检测与血清流行病学调查。

关键词：

基金资助：江苏省农业科技自主创新资金项目［CX(14)2090］;“十三五”国家重点研发计划（2016YFD0500900）