钒诱导蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞氧化应激模型的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第2期北京时间：

作者：黄选洋,王建萍,丁雪梅,白世平,曾秋凤,张克英

单位：(四川农业大学 动物营养研究所，动物抗病营养教育部重点实验室，抗病营养与饲料农业部重点实验室，成都 611130)

摘要：本试验旨在通过蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞（OMECs）的原代培养，构建利用偏钒酸铵（V5+）建立氧化应激模型的方法。试验选用开产前2~3周龄健康罗曼蛋鸡，分离、培养及鉴定OMECs。利用单因素设计6个不同水平的钒浓度（0、25、50、100、250、1 000 μmol•L-1）处理12 h后，测定细胞活力、细胞凋亡、细胞活性氧（ROS）的生成，细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性，丙二醛（MDA）的含量，细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放量。结果表明：1）分离培养的细胞24 h后形成细胞岛，呈“铺路石样”；免疫荧光染色细胞抗细胞角蛋白（CK18）、卵清蛋白（OVA）、雌激素受体1（ESR1）和孕酮受体（PGR）呈阳性，抗波形蛋白呈阴性。2）50和100 μmol•L-1的钒处理OMECs 12 h后，细胞活力分别下降到（69.90±2.78）%和（63.60±1.57）%，显著低于25 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05），但是显著高于250和1 000 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05）。3）细胞凋亡率随着钒添加量的增多而升高，且各处理组差异显著（P＜0.05）；1 000 μmol•L-1的钒细胞凋亡率为最高（P＜0.05）。4）ROS的测定结果表明，100和250 μmol•L-1钒处理组的FITC相对平均值显著高于0 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05），且250 μmol•L-1钒处理组的FITC相对平均值显著高于100 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05）。 5）50 μmol•L-1钒处理组SOD活性显著低于0 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05），但MDA含量差异不显著。而100 μmol•L-1钒处理组的MDA含量显著升高（P＜0.05）；50和100 μmol•L-1钒处理组细胞CAT活性显著低于0 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05）；LDH释放量随着钒的添加剂量的增加而升高，1 000 μmol•L-1钒处理组LDH的释放量最高，且100 μmol•L-1钒处理组LDH的释放量显著高于0 μmol•L-1钒处理组（P＜0.05），达到141.61±2.81 U•gprot-1。综上表明，OMECs原代细胞培养成功，在OMEC原代细胞里添加100 μmol•L-1的V5+处理12 h，可建立OMECs氧化应激模型。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（青年项目31402031）；四川省教育厅（青年基金13ZB0290）；科技部科技支撑计划（2014BAD13B04）；四川省科技厅（2014NZ0043；2014NZ0002；2013NZ0054）