山羊淋巴结炎病原菌的分离鉴定及多重PCR检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第2期北京时间：

作者：许国洋，付利芝，杨金龙，杨柳，徐登峰，张邑帆，沈克飞，张素辉

单位：1.重庆市畜牧科学院，重庆402460；2.重庆市畜牧科学院武陵分院，石柱 409100

摘要：旨在对重庆地区山羊体表型淋巴结炎病原菌进行分离鉴定，并建立相应检测方法。无菌采集山羊患病部位脓液，进行病原菌分离鉴定，依据菌株16S RNA基因序列构建系统进化发育树，同时设计特异性引物，建立PCR检测方法。结果表明，从病料中主要分离到3种病原菌，分别为伪结核棒状杆菌、化脓隐秘杆菌和金黄色葡萄球菌；依据伪结核棒状杆菌磷脂酶D、化脓隐秘杆菌16S RNA和金黄色葡萄球菌nuc保守核苷酸序列设计引物，建立的多重PCR检测方法，可以从3种菌株混合基因组中扩增出大小分别为507、1 378和278 bp的对应菌株特异性序列，该方法最低检出浓度为103 cfu•mL-1；对采集的80份临床样品进行多重PCR检测，发现伪结核棒状杆菌与金黄色葡萄球菌混合感染检出率为12.5%，伪结核棒状杆菌与化脓隐秘杆菌混合感染检出率为3.75%，三种菌混合感染检出率为7.5%。成功分离到山羊淋巴结炎的3种主要病原菌，并建立多重PCR检测方法，为该病的防控及治病机制研究奠定了基础。

关键词：

基金资助：重庆市基础与前沿研究计划项目（cstc2015jcyjA80035）；国家自然科学基金（31402149）