猪肿瘤坏死因子受体相关因子6的克隆、表达及对伪狂犬病病毒的抑制效应

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第2期北京时间：

作者：李永涛，李红杰，王晓雪，贾广敏，陈陆，赵军，王川庆，刘红英

单位：1. 河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002； 2. 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070；3. 河南省动物卫生监督所，郑州 450002

摘要：肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）是天然免疫信号通路中重要的接头分子，笔者旨在探索猪TRAF6的抗病毒和免疫调控功能。首先利用RT-PCR从猪外周血单核细胞克隆该基因，并进行序列比对分析；其次利用Piggybac转座子系统建立猪TRAF6稳定表达的PK-15细胞系；最后在细胞水平检测猪TRAF6对伪狂犬病病毒复制的影响以及对猪IFN-β等启动子活性的影响。结果显示，猪TRAF6基因为1 623 bp；将猪TRAF6基因连接到Piggybac转座子质粒成功构建真核表达载体PB-TRAF6，然后将重组质粒转染PK-15细胞，经药物处理和荧光筛选获得稳定表达TRAF6的细胞系；通过荧光定量PCR和Western blot确定稳定细胞系TRAF6的高效表达；体外抗病毒试验表明，TRAF6稳定细胞系能够显著抑制伪狂犬病病毒的复制；双荧光报告基因法检测发现，TRAF6可以促进poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素应答。结果提示猪TRAF6具有显著的抗病毒和免疫调节功能，为研究TRAF6的免疫学功能奠定基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31602033）；河南省高校科技创新团队支持计划（14IRTSTHN015）