玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚中细胞凋亡的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第2期北京时间：

作者：陈亚宁，吴彩凤，戴建军，张树山，钮莹芳，张德福

单位：1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106；2.上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室，上海 201106；3.上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306

摘要：旨在研究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚中细胞凋亡的影响。通过体外培养观察冷冻-解冻后囊胚腔的恢复情况，JC-1检测线粒体膜电位变化、TUNEL法检测胚胎中细胞凋亡水平，免疫荧光分析多种Caspase活性,以及qRT-PCR检测凋亡相关功能基因的mRNA表达水平。结果表明，冷冻-解冻后囊胚的囊胚腔恢复率（31.03%）和囊胚细胞数（31.81）与新鲜囊胚（100.00% 和38.17）相比均显著下降（P＜0.05）。冷冻后囊胚的线粒体膜电位（0.46）与新鲜囊胚（1.02）相比显著下降（P＜0.05）。TUNEL凋亡染色后，冷冻囊胚中凋亡阳性细胞的比例（10.13%）显著高于新鲜囊胚（5.92%，P＜0.05）。Caspase原位荧光染色结果表明， Pan-caspase、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3冷冻-解冻囊胚的荧光强度值（20.65、20.60、17.58和19.88）均显著高于新鲜囊胚（7.41、6.46、5.47和6.32，P＜0.05）。经qRT-PCR检测，冷冻组中Caspase-8、Caspase-9、TNF-α基因的mRNA表达水平均显著高于新鲜组（P＜0.05），BCL-2、SOD-1的mRNA表达水平则显著低于新鲜组（P＜0.05）。综上表明，玻璃化冷冻可造成猪孤雌激活囊胚线粒体功能下降，并在死亡受体和线粒体途径上共同介导囊胚内细胞凋亡的发生。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31372315）；国家转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX08006-005）；上海市农业委员会青年人才计划（2014-1-32；2014-1-33）