酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路初步研究

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：金鑫，张曼，田巧珍，刘骄，王云鹤，杨银凤

单位：1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；2.农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特 010018

摘要：文章旨在探索核因子-κB（NF-κB）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）通路是否介导益生性酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）诱导绵羊瘤胃上皮细胞（RECs）β-防御素-1（SBD-1）基因的转录。首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型，选用诱导SBD-1转录最高的菌液浓度和诱导培养时间进行信号通路初步研究，采用实时荧光定量逆转录PCR（RT-qPCR）对已建立的诱导SBD-1转录模型中的细胞膜受体——Toll样受体２（TLR2）、信号衔接蛋白——髓样分化因子（MyD88）以及NF-κB和MAPKs通路中的相关因子基因转录变化进行检测；然后选用NF-κB和MAPKs通路中的4种特异性抑制剂（即NF-κB通路特异性抑制剂PDTC、P38通路特异性抑制剂SB202190、ERK 1/2通路特异性抑制剂PD98059、JNK通路特异性抑制剂SP600125）通过单独或相互组合处理细胞后再进行诱导培养，同时采用RT-qPCR的方法检测用抑制剂处理绵羊RECs后SBD-1 mRNA的转录水平。结果表明：酿酒酵母菌刺激RECs后，NF-κB和MAPKs通路中各因子NF-κB、P38、JNK、ERK1/2、细胞膜受体TLR2与信号衔接蛋白MyD88的mRNA水平与未刺激组相比均有所升高，且呈显著性差异（P<0.01或P<0.05）；通过单独或组合添加抑制剂后再诱导，均发现特异性抑制剂PDTC、SB202190、SP600125、PD98059可极显著抑制酿酒酵母菌对RECs SBD-1的上调作用（P<0.01），且P38通路特异性抑制剂SB202190的抑制效果最明显。结果提示，酿酒酵母菌诱导绵羊RECs SBD-1的转录可能与TLR2-MyD88-NF-κB/MAPKs通路有关，但以TLR2-MyD88-MAPKs中的TLR2-MyD88-P38通路为主要的信号通路。

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基金资助：国家自然科学基金（31160491；31560682）