慢病毒介导siRNA抑制1型鸭肝炎病毒复制

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：王永娟，董亚青，朱善元，王安平，洪伟鸣，吴双，左伟勇

单位：江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，泰州 225300

摘要：为筛选能抑制DHAV-1复制的siRNA，探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防治中的应用，采用PCR法扩增DHAV-1 RdRp基因，并构建pEGFP-RdRp融合表达EGFP-RdRp蛋白；根据RdRp的序列测定结果，设计3条RdRp特异siRNA，并合成相应shRNA分别插入pmiRZipΔ中构建pRdRp-shRNA；共转染pRdRp-shRNA和pEGFP-RdRp于HEK-293T细胞，通过荧光显微镜法、流式细胞术、相对荧光定量PCR法筛选抑制效率较高的siRNA；将高效siRNA用于病毒载体pmiRZip介导的慢病毒制备；通过计算重组慢病毒转导、DHAV-1感染的鸭胚胎成纤维细胞中病毒TCID50和RdRp基因表达量确定siRNA对病毒及病毒基因的抑制作用。结果显示，3个siRNA均能抑制RdRp基因的表达，包含GDD模体的shRNA2的抑制率最高，对应重组病毒能使DHAV-1的TCID50下降6.2 lg，RdRp基因转录量下降89.6%，抑制时间至少达120 h，为鸭病毒性肝炎临床防治提供了新思路。

关键词：

基金资助：2016年度江苏省高校自然科学研究面上资助项目（16KJB230004）；江苏省“六大人才高峰”第十二批培养对象资助项目（NY-023，10410015002）；江苏省大学生创新创业训练计划校企合作基金项目（201612806030H）